Искусственный химический синтез заданной последовательности РНК

Процесс

1. Первый нуклеотид последовательности через его 5'-фосфатную группу химически закрепляют на твердой подложке, например, полистирола.
2. Все потенциально химически активные группы и атомы его нуклеинового основания (аминогруппы, кислород) временно блокируются присоединением инертной «защиты». 3'-ОН группа сахара не блокируется.
3. Все нуклеотиды, подлежащие последовательному присоединению защищаются не только по нуклеиновым основаниям, но и по 3'-ОН группе РНК. Для реакции остается свободной только ОН-группа фосфорной кислоты.
4. В реакционную среду вносят "защищенный" второй нуклеотид нужной последовательности
5. В реакции между двумя ОН-группами отщепляется вода и устанавливается ковалентная фосфодиэфирная связь двух нуклеотидов.
6. Cнимается химическая защита с 3'-ОН группы присоединившегося второго нуклеотида
7. В реакционную среду вносят третий защищенный нуклеотид ... и так далее

Отщепление воды и образование фосфодиэфирной связи происходит не само собой, а в присутствии сложного химического катализатора реакции.

Автоматические синтезаторы

Современные автоматические синтезаторы производят такую «сборку» олигонуклеотидов (РНК, ДНК) по заданной программе на длину до сотни нуклеиновых оснований.

Затраты на синтезирование олигонуклеотидов зависят от длины (как правило до 60-100) и количества олигонуклеотида, измеряемое в ОЕ (оптических единицах).

Ссылки

• Конспект
• Синтезаторы ДНК/РНК, также можно скачать программы по управлению синтезов, работающие в демо-режиме без самого синтезатора
• Виды синтезаторов, тех. характеристики, ориентировочные цены (от 5000 EUR)
• Ориентировочные расценки за синтез
• appliedbiosystems.ru европейский производитель био. приборов и услуг
• Варианты синтеза РНК
• О процессе синтеза