Изучение микромира под микроскопом/§2
Приготовление препарата
[править]Высушивание и фиксирование препарата
[править]Для приготовления демонстративного препарата на середину чистого предметного стекла наносят небольшую каплю воды и с помощью бактериальной петли помещают в нее исследуемый материал. Материал равномерно распределяют на стекле таким образом, чтобы образовался тонкий мазок круглой или овальной формы размером 1-2 см2. Затем препарат высушивают либо при комнатной температуре на воздухе, либо в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки.
При фиксации исследуемого материала он прикрепляется к стеклу, и возрастает восприимчивость микробов к окраске. После фиксации производят окраску мазка.
Фиксация нагреванием
[править]Наиболее простым и самым распространенным способом является фиксация жаром - нагреванием на пламени горелки: препарат несколько раз проводят через наиболее горячую часть пламени горелки.
Фиксация спиртом
[править]Лучшим фиксатором является метиловый спирт. В метиловом спирте мазки выдерживают не менее 5 мин, а в этиловом и денатурированном спирте и смеси Никифорова — не менее 30 мин.
Окраска микроорганизмов
[править]В естественном состоянии бактерии имеют такой же коэффициент преломления, как и стекло, поэтому они невидимы под микроскопом. Благодаря окраске можно изучать их морфологические особенности.
Простой способ
[править]При простой окраске, которая позволяет быстро изучить морфологические особенности микробов, обычно используют только один краситель, чаще всего красного цвета - фуксин (окраска производится в течение 1-2 мин) или синего цвета - метиленовый синий (время обработки мазка краской 3-5 мин).
Процедура: на высушенный препарат наливают краситель, затем смывают водой, высушивают.
Сложный способ
[править]Методика окраски по Граму заключается в последовательной обработке фиксированного мазка:
- окраске генцианвиолетом (краситель фиолетового цвета) через фильтровальную бумагу (1-2 мин)
- обработке раствором Люголя (1 мин)
- обесцвечивании спиртом (0,5-1 мин - до отхождения фиолетовых струек краски)
- промывании водой
- окрашивании фуксином (1-2 мин).
Сущность метода состоит в том, что грамположительные бактерии удерживают комплекс краситель - йод и не обесцвечиваются спиртом, грамотрицательные не обладают этим свойством, т. е. обесцвечиваются спиртом (дифференцирующим веществом) и докрашиваются фуксином. В результате грамположительные бактерии приобретают фиолетовый цвет, грамотрицательные - красный.